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樊克淺談:抗肽抗體的制備實驗

發布時間:2018-08-23 閱讀:806

提高免疫原性肽的抗血清,是zui簡單的方法,獲得非隔離的蛋白質的抗體,例如,對來自DNA序列信息的推定蛋白質序列。 這種方法也是有用的,當隔離的抗原是困難或費時,或當抗原是一個大的蛋白家族的成員。


實驗步驟:

1.  將10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸鈉緩沖液中,置于一個2 ml 的玻璃試管,加50 μl MBS/DMF溶液,于室溫下溫和攪拌30 min。
 
2.  加樣到PD-10柱子上,上柱前用10 ml 的0.1 mol/l pH6.8的磷酸鈉緩沖液預平衡柱子。

3.  上樣后每0.6 ml 加I為一組分分部收集洗脫液,監測A280并收集一個蛋白峰。

4.  匯集一個峰的洗脫液于15 ml 的玻璃試管中。

5.  將10 μmol 的肽溶于20 mmol/l EDTA中,終濃度約為1 mg/ml。

6.  將其加到裝有MBS/BSA復合物的玻璃試管中。

7.  于室溫下在,氮氣中振搖4 h,于4℃對3 l PBS透析過夜。

8.  換PBS后繼續透析4 h。
 
9.  將樣品分裝成小份,貯存于-20℃。

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