人ELISA試劑盒實驗操作中，須特別注意細節問題，細節往往決定著試驗的成功與否。關于ELISA試劑盒的實驗操作，這些細節很重要：

1、吸取液體時速度不易太快，以免產生氣泡，人ELISA試劑盒吸取的量不夠準確。

2、吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。

3、加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。

4、合理安排檢測量，以免反應板過多造成洗板等待時間長。

5、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

6、未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標記抗人IgG工作液請依據所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標記抗人IgG工作液。

7、要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數據的準確性，又能反映出試劑盒的度。

8、每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。

9、手工洗板時每次加入洗滌液后。應靜置15～30s，不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。

10、樣品稀釋液應用加液器加注，并經常校對其準確性。

11、為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜。

12、ELISA試劑盒實驗中，加樣后及時放人孵箱，標本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底。

13、剩余樣品及廢棄物應經121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

14、對樣本的結果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。

15、沒有去離子水或雙蒸水時，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。

16、在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標準品溶液。

17、人ELISA試劑盒洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。