天天色播-欧美综合一区-特黄三级又爽又粗又大-久久a级片-人人干av-av在线日韩-欧美在线不卡视频-人体av-欧美在线二区-免费高清毛片-丰满少妇高潮在线观看-奇米第四色7777-国产肉体ⅹxxx137大胆-男女视频国产-制服 丝袜 激情 欧洲 亚洲-天天操天天舔天天干-中国精品毛片-免费看黄色一级大片-成人涩涩网站-成人试看120秒体验区-亚洲区第一页-生活片av-国产一区99-樱桃国产成人精品视频-国产自在自拍

主營產品: 科研人類ELISA試劑盒說明書,大鼠ELISA試劑盒代測,小鼠ELISA試劑盒廠家
產品分類

公司名稱:上海古朵生物科技有限公司

公司地址:上海市嘉定區曹安公路5588號

郵政編碼:

公司電話:18321664727

公司傳真:

電子郵件:272967093@qq.com

聯 系 人:洛辰 ( 女士 )

部門(職位):

手機號碼:13621980056

即時通訊:        

技術文章

科研君的經驗之談:如何確認RNA的質量

發布時間:2018-11-19 閱讀:543

1)檢測RNA溶液的吸光度

      280、320、230、260nm下的吸光度分別代表了核酸、背景(溶液渾濁度)、鹽濃度和蛋白等有機物的值。一般的,我們只看OD260/OD280(Ratio,R)。1.82.0時,我們認為RNA中蛋白或者時其他有機物的污染是可以容忍的,不過要注意,當你用Tris作為緩沖液檢測吸光度時,R值可能會大于2(一般應該是<2.2的)。當R<1.8時,溶液中蛋白或者時其他有機物的污染比較明顯,你可以根據自己的需要決定這份RNA的命運。當R>2.2時,說明RNA已經水解成單核酸了。


2)RNA的電泳圖譜
      一般的,RNA的電泳都是用變性膠進行的,但是根據我的經驗,如果你僅僅是為了檢測RNA的質量是沒有必要進行如此麻煩的實驗的,用普通的瓊脂糖膠就可以了。
電泳的目的是在于檢測28S和18S條帶的完整性和他們的比值,或者是mRNA smear的完整性。一般的,如果28S和18S條帶明亮、清晰、條帶銳利(指條帶的邊緣清晰),并且28S的亮度在18S條帶的兩倍以上,我們認為RNA的質量是好。

       以上是我們常用的兩種方法,但是這兩種方法都無法明確的告訴我們RNA溶液中有沒有殘留的RNA酶。如果溶液中有非常微量的RNA酶,用以上方法我們很難察覺,但是大部分后續的酶學反應都是在37度以上并且是長時間進行的。這樣,如果RNA溶液中有非常微量的RNA酶,那么在后續的實驗中就會有非常適合的環境和時間發揮它們的作用了,當然這時你的實驗也就完了。


     下面,我們介紹一個可以確認RNA溶液中有沒有殘留的RNA酶的方法。


3)保溫試驗

     方法很簡單的,按照樣品濃度,從RNA溶液中吸取兩份1000 ng的RNA加入至0.5 ml的


       離心管中,并且用pH7.0的Tris緩沖液補充到10 ul的總體積,然后密閉管蓋。把其中一份放入70℃的恒溫水浴中,保溫1 h。另一份放置在-20℃冰箱中保存1 h。


       時間到了之后,取出兩份樣本進行電泳。電泳完成后,比較兩者的電泳條帶。如果兩者的條帶一致或者無明顯差別(當然,它們的條帶也要符合方法2中的條件),則說明RNA溶液中沒有殘留的RNA酶污染,RNA的質量很好。相反的,如果70℃保溫的樣本有明顯的降解,則說明RNA溶液中有RNA酶污染。

在線客服

聯系人:洛辰
QQ:
電話:18321664727
手機:13621980056