把細胞消化下來(同5)并離心。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管里，4℃冰箱30min，-20℃30min，-80℃過夜，寫明細胞種類，凍存日期。然后放到液氮灌中保存。

凍存液的配制：50%的完全培養基+40%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

培養細胞基本形態

培養細胞zui常見的是貼附于平面支持物細胞。在一般光鏡下生存中的細胞是均質而透明的，結構不明顯。細胞在生長期常有1-2 個核仁。在細胞機能狀態不良時，細胞輪廓會增強，反差增大。若胞質中時而出現顆粒、脫滴和腔泡等，表明細胞代謝不良。體外培養細胞根據它們在培養器皿是否能貼附于支持物上生長特征，可分為貼附型生長和懸浮型生長兩大類。貼附型細胞在培養時能貼附在支持物表面生長。如羊水細胞為貼附型細胞，常表現為成纖維型細胞和上皮細胞生長。懸浮型細胞在培養中懸浮生長。

哺乳動物細胞冷凍保存

主要目的：

（1）保存種子細胞，以便隨時取用。這是保存細胞的zui主要目的。

（2）減少細胞被微生物污染的危險性。

（3）減少細胞之間交叉污染的危險性。

（4）減少細胞因傳代培養而引起的遺傳變異和形態改變。

（5）避免有限細胞系出現衰老或惡性轉化。

(6) 降低人力和物力。

冷凍保存細胞的解凍與復蘇要點：慢凍快融

（1）快速解凍。凍存細胞從液氮中取出后，應立即放入 37℃水浴中，輕輕搖動冷凍管，使其在 1 分鐘內全部融化（不要超過 3 分鐘）。

（2）解凍操作過程動作要輕。由于冷凍保存過的細胞變得非常脆弱，不僅解凍速度要快，而且動作要輕。一般情況下，解凍后的細胞可直接接種到含完全生長培養液的細胞培養瓶中直接進行培養（1ml 凍存細胞液加入到 25－30ml 新鮮完全培養液中），24 小時后再用新鮮完全培養替換舊培養液，以去除 DMSO。如果，細胞對冷凍保護劑特別敏感，那么，解凍后的細胞應先通過離心去除冷凍保護劑，然后再接種到含完全生長培養液的培養瓶中。

特別注意：

（1）解凍時務必注意安全，預防冷凍管爆裂。，要帶手套，用鑷子將細胞冷凍管從液氮中取出，放入 37℃水浴中。切不可直接用手，以免凍傷。

（2）冷凍管在水浴中解凍時，要將凍存管蓋子擰緊，確定擰緊后再投入水浴鍋中，注意液面不可超過凍存管蓋面，否則，易發生污染。