原代細胞培養：由于原代細胞生長緩慢，繁殖一定的代數停止生長（一般10代以內）。所以一般認為：培養的原代的第1和傳代到第10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。

細胞分離的常見問題解答：

Q：為什么我取得原代腫瘤組織，分離的卻不是腫瘤細胞？

A：取材時，我們要熟悉所需組織的類型和部位特征，選擇腫瘤細胞集中、活力較好的部分。避免結締等正常組織。

Q：若是細胞中混成纖維細胞，如何去除？

A：成纖維細胞的去除對于腫瘤細胞培養十分重要。由于成纖維細胞貼壁速度較腫瘤細胞快，可利用反復貼壁法使二者分離，進而達到清除成纖維細胞的目的。

Q：為什么離心后，沒有細胞分離出來？

A：需要考慮消化酶的因素，由于腫瘤組織較致密，胰酶無法消化，一般選用膠原酶，如膠原酶Ⅳ。若是組織十分致密可以再結合機械法，如研磨或者攪拌加速細胞分散。如下表為二者的區別：

注：膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細胞專用膠原酶，根據分離的組織類型需選擇合適的膠原酶類型。

Q：消化時間如何確定？

A：具體的消化酶的量和消化時間可根據組織類型和多少進行調整。

Q：消化之前為什么用EDTA?

A：EDTA是一種非酶消化物，又稱螯合劑，對一些組織，尤其是上皮組織分散效guo好。與細胞上的鈣、鎂離子結合形成螯合物后，形成的機械力可使細胞分散。

Q：細胞量太少，長不起來怎么辦？

A：有幾種辦法，如對沒消化完的組織塊反復消化，盡量多收集一些細胞；并且盡量傳代到小皿里，如6孔板都可以。若是細胞仍太少，應耐心等待，盡量不要傳代，只換液。

Q：細胞難以貼壁？

A：盡快使接種的細胞貼壁，是決定培養能否成功的關鍵。為了盡快促進細胞貼壁，可以提前1h將千分之的明膠鋪于培養板。

Q：腫瘤原代細胞培養方法與細胞系不同之處在哪里？

A：培養基一般選用RPM1640，DMEM等，建議Z好能加入促生長的物質：如胰島素、氫化可的松、雌激素、EGF等因子。

Q：皮膚組織作為正常組織，與腫瘤組織分離主要區別在哪里？

A：先，皮膚組織需要用中性分離酶dispaseII將表皮分離出來；其次，在消化時，用的是胰酶，而非膠原酶，并且胰酶的濃度用的是0.05%，而不是0.25%。

Q：表皮的分離需要注意什么？

A：表皮一般可以完整的撕脫下來，溫度的變化，孵育的時間以及所用的酶的濃度都會影響表皮是否能完整剝離。

Q：為什么需要無Ca血清來終止消化？

A：因為Ca²⁺的濃度可以影響角質形成細胞的生長，并且培養時必須嚴格調控培養基中的Ca²⁺濃度。