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BCA蛋白濃度測定方法和操作注意事項

發布時間:2019-10-21 閱讀:1265

BCA 蛋白定量法是一種快速靈敏、穩定可靠的蛋白定量測定方法,其測定范圍是10-2000ug/ml,是比Lowry 法更優越的專用于檢測總蛋白質含量的產品。

 BCA 蛋白定量測定方法:(96孔板)

1、配制BCA 工作液: 根據標準品和樣品數量,按50 體積試劑A,1 體積試劑B 配制適量BCA 工作液,充分混勻。

2、將蛋白標準品按0, 1, 2, 4, 6,8, 10 微升加到96 孔板的蛋白標準品孔中,加滅菌雙蒸水補足到10 微升;取10 微升待測樣品加入96 孔板。每個測定要做2-3 個平行。

3、向帶測樣品孔和蛋白標準品孔中加入200 微升BCA工作液(即樣品與工作液的體積比為1:20)混勻。

4、37℃溫浴30min。冷取至室溫。

5、酶標儀562nm 波長下測定吸光度。

6、制作標準曲線,從標準曲線中求出樣品濃度。

 BCA 蛋白定量測定操作注意事項:

1、反應顏色的深淺除了與樣品的蛋白質濃度相關外,還與反應的溫度有關。如果樣品的濃度較高(>50μg/ml),反應溫度一般采用37 度。如果樣品蛋白質的濃度較低(<50μg),反應的溫度為60℃,該溫度下,色氨酸、酪氨酸和肽鍵得到充分氧化,大大提高檢測靈敏度。

2、該方法檢測的蛋白質濃度范圍20μg-500μg/ml;當蛋白濃度<20ug/ml 時,推薦60℃溫浴,并將蛋白液:工作液的比例調至1:8 進行測定(增強法)可以檢測到5ug/ml。

試劑A 和B 在室溫的穩定期至少1 年以上。標準蛋白液保存在-20℃,短期則4℃保存.

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