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技術文章

抗體檢測常用的幾種方法

發布時間:2020-06-24 閱讀:561

    一、直接法

    將抗原直接固定在固相載體上,參加酶符號的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。

    1. :操作手續簡略,因無須運用二抗可防止交互反響。

    2. 缺陷:實驗中的一抗都得用酶符號,但不是每種抗體都適合做符號,費用相對進步。

    二、間接法

    此測定辦法與直接法相似,不一樣在于一級抗體沒有酶符號,改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。

    1. :二抗能夠加強信號,并且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它zui多的免疫反響性。

    2. 缺陷:交互反響發作的機率較高。

    三、雙抗體夾心法

    被檢測的抗原包被在兩個抗體之間,其間一個抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體,此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量;或不符號,再透過酶符的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當心選擇,才可防止交互反響或競爭一樣的抗原部位。

    1. :高活絡、高專一性,抗原無須事前純化。

    2. 缺陷:抗原必定得具有兩個以上的抗體部位。

    四、根據細胞法(zui新ELISA技術)

    是一種新的定性蛋白檢測技術,將細胞直接在微孔板里培育,待檢測時,不需抽提蛋白和裂解細胞,便可直接丈量微孔板里蛋白經影響或抑制作用后的改變。

    1. :無需裂解細胞,所以方針蛋白丟失zui少,可測定完好細胞、黏附細胞、還有非粘附細胞。

    2. 缺陷:不能測定抗原量。

    五、競爭法

    樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競爭一樣的抗體,當樣品里的自在抗原越多,就能夠越多的抗體,而固定抗原就只能到較少的抗體,反之亦然。經清潔過程,洗去自在抗原和抗體的復合物,只留下固定抗原和抗體的復合物,拿來與只要固定抗原的對照組成果相比擬,依據呈色區別就可計算出樣品里的抗原含量。

    1. :可適用比擬不純的樣本,并且數據再現性很高。

    2. 缺陷:全體的敏感性和專一性都較差

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