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技術文章

全血細胞培養染色體技術常用試劑配制

發布時間:2020-08-14 閱讀:583

    一、實驗室應用試劑配制

    (一)培養液

    (1)RPMI1640培養液:稱取RPMI培養基9.8g,碳酸氫鈉1.9g、青霉素100u/ml,加雙蒸水至1000ml,調節 pH7.2~7.4無菌過濾凍存備用。

    (2)小牛血清商品

    (3)植物凝集素(PHA)

    (4)pH調整液:5% NaHCO3溶液高壓滅菌(8磅15min),0.1N稀鹽酸液100ml。

    (5)秋水仙素:10mg/ml無菌過濾高壓滅菌(8磅10min)。

    (6)磷酸緩沖液:pH7.4。

    磷酸氫二鈉28.8g(H2O)、磷酸二氫鉀2.67g(無水),溶于1000ml雙蒸水中,加肝素,終濃度為100u/ml。

    (7)Giemsa染色液:

    Giemsa粉劑           1g

    甘油              66ml

    在研缽中,加入少量甘油油仔細研磨然后放甘油全部加磨,60℃溫箱中保溫2h,冷卻后加入甲醇66ml。裝入有色瓶中混合待用。染色時用pH7.4磷酸緩沖液稀釋10倍,隨配隨用。

    (二)固定液

    (1)甲酸:冰乙酸3:1混合即用。

    (2)PBS緩沖液配制:

    NaCl   16g   Na2HPO4(12H2O)   5.65g

    KCl   0.4g  KH2PO4        0.4g

    加雙蒸水至1000ml pH7.0。

    取5%胰酶(生理鹽水配制)1ml加入50ml PBS液中(zui終濃度為0.025%),4℃冰箱待用。

    二、細胞培養(Bhatl B和McGee JOD,1990)

    1.完全培養基

    RPMI             76.0ml

    胎牛血清           20.0ml

    植物凝集素          2.0ml

    抗生素/抗菌素溶液(10

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