用好的血清，細胞一定狀態良好？養細胞細心、體貼像照顧小孩紙，細胞一定「平平安安」？但 MTT 等一些細胞實驗結果卻異常。因為你的細胞已悄悄被支原體污染了。

支原體是一種生命力頑強的細菌，它和其他細菌的區別在于，支原體沒有細胞壁，只有柔軟的細胞膜。嬌小的身材（0.15-0.3μm）讓它可以輕松穿過濾器。

由于身形小，培養物不會表現出渾濁或其他明顯可見的特征，因此支原體很容易被忽視。但支原體其實已經隨著操作者的操作「偷偷地」潛入超凈工作臺，并附著在血球計數器、移液器、廢液缸等物體表面。

常見的支原體污染來源有：

1. 受污染的培養基、血清、或試劑

2. 不徹底的滅菌

3. 培養箱：目前常見的培養箱都帶有通氣扇和 CO2 瓶，在開、關內門的過程中，被支原體污染的顆粒會被擾動，可能造成細胞污染。其他實驗設備的使用也可能造成污染顆粒的擾動，如移液器、離心機等。

4. 液氮

液氮也可以成為傳播支原體的媒介。支原體具有頑強的生命力，即使沒有經過低溫冷藏過程，支原體也可以在液氮里存活。在液氮中，支原體雖然不會增殖，但是仍可以污染保存在其中的細胞，因此建議將凍存管保存在液氮罐的氣相層中。

5. 空氣懸浮物

在培養過程中產生的懸浮顆粒是微生物污染的主要來源，一些常見的儀器或普通的實驗操作都會產生這些顆粒，例如移液器、真空泵、離心機、冰箱等。攜帶微生物的顆粒直徑多在 4-28μm 之間，在靜止空氣中，它們以 30 cm/min 的速率移動，因此在密閉、不通風的房間或實驗室內，基本不會造成生物污染。

但是，當實驗者進入房間時，沉積的顆粒會被擾動，懸浮起來的顆粒則有可能污染細胞。因此嚴格的無菌操作意識很重要。此外，實驗動物也會帶來一些被污染的懸浮顆粒。

除上述的情況外，濫用抗生素、密封不嚴、受污染細胞等也都可能是支原體污染的來源。

支原體污染的危害：

1. 支原體導致細胞密度的減少，并引發細胞不可逆的退化。

2. 支原體吸收、破壞培養基中的精氨酸，抑制細胞生長、引發細胞凋亡，造成細胞活性降低、細胞脫落等現象 。有甚者，也可能導致染色體畸變，因為精氨酸是細胞核內組蛋白的重要成分。

3. 支原體對 MTT 有還原作用，因此常規的細胞毒性實驗 MTT 實驗的結果會受到支原體的嚴重干擾；某些支原體也可以直接誘導樹突狀細胞的成熟，這對于人體免疫細胞的腫瘤治療來說，無疑是一個災難；除此之外，支原體的存在可以顯著改變數百個基因的表達水平。

由此可見，支原體不僅影響細胞的健康，也會影響細胞實驗的結果。因此，有必要定期檢測支原體。

建議在引進新細胞、凍存細胞前或發生細胞房污染等情況時，及時對細胞進行支原體檢測，平時對正常培養的細胞也有定期檢測的必要，以做到及時發現，及時處理，避免大的損失。

防止污染的方法

1. 改進無菌技術、嚴格無菌操作

對新進實驗室的人員，要由有經驗的人員幫帶，嚴格監督其實驗操作；此外建議記錄每一次的污染事件，以便分析解決污染問題。

2. 檢測外來細胞

因為外來的細胞攜帶污染很常見，因此，選擇可靠的細胞來源非常重要。

在沒有細胞培養箱的情況下，可疑的細胞培養物應培養在帶蓋的培養瓶中，不要使用培養板或沒有密封的培養皿。此外，處理這類細胞應在一天工作都結束后進行，并且使用的培養基和試劑，后還要對超凈工作臺進行徹底除菌。

其他方面，如減少懸浮物產生、正確使用抗生素、定期進行支原體檢測等，對于防止污染也尤為重要。