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如何選擇合適的植物培養基

發布時間:2022-01-11 閱讀:604

植物組織培養基包括多種成分:無機鹽、維生素、氨基酸、生長調節劑、糖類、瓊脂(或結冷膠)和水。所有這些成分在植物組織培養中至少有1種或多種作用。

植物組織培養基中的礦質元素進入植物細胞后用于合成有機分子或作為酶反應中的催化劑。可溶性鹽離子在植物電離分子運輸中作為平衡離子,滲透壓的調節以及維持植物體電化學勢的平衡都起著重要的作用。

氮、硫和磷是蛋白質和核酸的組成成分。鎂離子和許多的微量元素是許多酶和細胞器的基本組成部分,因此在多種反應中起著重要的催化作用。

鈣離子和硼酸主要存在植物的細胞壁中,尤其是鈣離子在維持生物膜穩定性起著重要作用。相反,鉀離子和氯化物在滲透調節中起著重要作用,參與維持電化學勢的平衡,同時也是許多酶的活化劑。



下面對常用培養基做一個介紹:

MS培養基,初是Murashige 和Skoog 于1962年為煙草細胞培養設計的,經過改良后,現今可以用于多種植物的組織培養,如馬鈴薯、胡蘿卜、甘藍等,許多研究者根據不同的試驗需要,先后研發了改良MS培養基包括含1/2大量元素、含3/4大量元素、用NaNO3替代NH4NO3、不含NH4NO3、含1/2NH4NO3和KNO3的培養基等,一般需要根據具體的試驗材料和試驗目的選用具體的培養基。

N6培養基,被定義用來改善水稻花粉愈傷組織的形成、生長和分化。NH4+離子濃度的適范圍是7.0 mM(或3.5mM(NH4)2SO4))。高濃度的銨鹽會顯著抑制水稻花粉的生長和分化。KNO3和培養基中其他成分的濃度不會影響花粉的生長。

B5培養基是1968年由Gamborg等為培養大豆根細胞而設計的,雙子葉植物在B5培養基上生長適宜。B5(Gamborg)培養基的主要特點是含有較低的銨,這是因為銨可能對不少培養物的生長有抑制作用。

NB培養基,為N6培養基大量元素和B5培養基的微量元素和維生素混合物。

木本植物培養基也叫WPM培養基,是1981年由Lloyd和McCown為山月桂莖尖培養專業設計,根據MS培養基改良而來,相對MS培養基而言,使用了硫酸鉀替換了硝酸鉀,硝酸銨的含量也降低到了MS培養基的1/4,氮鹽也主要以硝酸鈣的形式供應,現主要用于木本植物的組織培養。

配置培養基的注意事項

1、調pH 用滴管吸取物質的量濃度為1 mol/L的NaOH溶液(一般剛配好的培養基都是偏酸),逐滴滴入溶化的培養基中,邊滴邊攪拌,并隨時用的pH試紙(5.4~7.0)測培養基的pH,一直到培養基的pH為5.8為止(培養基的pH必須嚴格控制在5.8)。在這里要注意的是,許多同學在做培養基時明明PH值調到了5.8但是還是不凝固,這個原因可能是:
a. 先檢查培養基組分中瓊脂的用量和質量
b. 如果瓊脂沒有問題,滅菌時間過長,一般在0.15MPa超過1小時后易凝固不良。
c. 如果以上都正常,我們還要考慮稱量工具是否準確,有些小市場買的稱量工具不是很準確,建議稱量工具到正規廠家或專業商店購買。

2、培養基的分裝溶化的培養基應該趁熱分裝。注意不要讓培養基沾到瓶口和瓶壁上,因為粘在瓶口容易污染。

3、pH不要調過頭,以避免回調而影響培養基內各離子的濃度。

4、需不斷攪拌,以防瓊脂糊底燒焦。

5、嚴格按照培養基配方配

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