免疫組化的二抗有區(qū)別么!要怎么選?

  免疫組化大家基本上都做過，你知道有二抗，也應(yīng)該知道免疫組化的原理就是一抗結(jié)合到目標蛋白，再有二抗來進行信號放大，古朵小編詳解大概是這樣：

  但是你知道二抗的信號放大實際上有多種方法……這就需要你進行二抗標記方法的選擇，簡單的二抗標記方法是直接法：

  就是直接在二抗上標記酶，比如HRP，來進行顯色，這樣的二抗實際上很便宜，但是缺點就是靈敏度低，好多低豐度的蛋白，結(jié)合不上，免疫組化染出來的效果就不太好。

  第二種方法，叫做PAP，比如二抗標記了HRP，他們就在孵育二抗后，再孵育一種能結(jié)合HRP的一抗，就像這樣：

  這種方法靈敏度是上去了，但是非特異性增高了，于是被主流淘汰了。

  第三種方法被稱為ABC法或者SABC法，主要是在二抗上標記生物素，孵育二抗后，加入親和素以及標記了HRP的生物素，以這樣的聚合方式，來進行信號的放大作用：

  這種方法的優(yōu)點是能夠成倍提高靈敏度，但同時也會提高非特異性，于是就產(chǎn)生了第四種方法，LSAB法標記的二抗：

  這種方法，直接在親和素上加上HRP標記，靈敏度也很高，同時降低了SABC法的非特異性。而且，LSAB法在實驗的時一般孵育時間短(通常就10分鐘)。

  但SABC法和LSAB法在實驗過程中會需要進行內(nèi)源生物素封閉，會麻煩一些。為了省去麻煩，就產(chǎn)生了第五種標記方法，也就是Polymer法，就是在二抗上標記聚合的HRP：

  這樣二抗的信號就得到了放大，靈敏度也提高了，但Polymer法、SABC法、LSAB法，都不能用于定量實驗，只能用在IHC上。

  那免疫熒光呢?免疫熒光主流是采用直接法、LSAB法，以及直接標記或者LSAB標記的三抗來進行信號放大的。總結(jié)一下，就是直接法的二抗便宜但是靈敏度差;PAP法基本已經(jīng)淘汰，LSAB和SABC法的靈敏度高，但是貴，步驟多;Polymer法靈敏度高，步驟簡單，但是貴。

  免疫組化二抗上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。