古朵闡述——做ELISA實驗時要注意那些問題

  上海古朵生物科技有限公司的ELISA試劑盒質量可靠 靈敏度高 效果穩定 實驗好.那做做ELISA實驗時要注意那些問題呢?下面跟隨古朵技術小編一起來探討了解一下吧!

  一 樣品稀釋

   一般產品的樣品稀釋倍數均通過大量試驗確定,以保證試驗的靈敏度和特異性.酶聯免疫反應是一種敏感性很高的反應,如果血清不稀釋,不可避免會產生很強的非特異性反應,出現假陽性.

  二 試劑盒平衡

  Elisa中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20～30分鐘以上.平衡時間太短會造成試劑混勻不夠,樣品孵育時間相對縮短,ELISA反應不夠充分.冬季室溫低,可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘.

  三 樣品和試劑的混勻

  在稀釋前 后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗的均一性.

  四 加樣

  加樣是一項很重要的步驟.加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產生氣泡.加樣太快,無法保證微量加樣的準確性和均一性.加在孔壁上部的非包被區,易導致非特異吸附.

  五 溫育

  溫育是ELISA中影響成敗的為關鍵因素.ELISA作為一種固相免疫,抗原抗體的結合反應在固相上進行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結合,必須在一定的溫度條件下反應一定的時間.

  六 洗板

  固相免疫技術是一種非均相免疫技術,需以洗滌操作將特異結合于固相的抗原或抗體與反應溫育過程中吸附的非特異成份分離開來,以保證ELISA的特異性.洗液盡量不要溢出孔外;加洗液后要靜置1分鐘,甩去板孔中洗液后,一定要大力拍干;及時換吸水紙,尤其是拍過酶標記物的吸水紙一定要棄去,否則可能影響試驗結果.

  七 顯色

  顯色一定要控制時間,根據試劑盒說明操作即可.一般來說,顯色時間過短,結果偏低;顯色時間過長,空白增高或者非特異性顯色增加.

  八 比色

  比色要注意波長的選擇.以TMB為底物和以OPD為底物的試劑盒均有使用,而前者比色波長為450nm,后者為492nm,濾光片需根據要求隨時換.因此,容易出現濾光片錯用的問題.

  ELISA 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。