人唾液皮質醇ELISA試劑盒操作說明

  本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中人唾液皮質醇的含量。

  有效期：6個月

  保存條件：2-8℃

  人唾液皮質醇ELISA試劑盒實驗原理

  試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人唾液皮質醇捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人唾液皮質醇呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，計算樣品濃度。

  人唾液皮質醇ELISA試劑盒樣本處理及要求

  血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

  2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

  3. 細胞培養物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

  注：標本溶血會影響后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

  需要而未提供的試劑和器材

  酶標儀(450nm)

  加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

  37℃恒溫箱

  蒸餾水或去離子水

  注意事項

  嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

  洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

  消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

  底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。

  避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

  在儲存和溫育時避免強光直接照射。

  平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

  任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

  不能使用過期產品。

  如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

  試劑準備

  試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。

  20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

  操作步驟

  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

  樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

  每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

  實驗結果計算

  以所測標準品的OD值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。

  試劑盒性能

  檢測范圍：3.75 ng/mL – 120 ng/mL。

  靈敏度：低檢測濃度小于0.1 ng/mL。

  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

  重復性：板內變異系數小于10% ，板間變異系數小于15% 。

  ELISA試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。