古朵生物：ELISA實驗注意事項

  1、固相載體選擇

  聚苯乙/烯：具有較強的吸附蛋白質的性能，抗體或抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學活性。

  聚氯乙/烯：聚氯乙/烯對蛋白質的吸附性能比聚苯乙/烯高，但空白值也略高。

  良好的ELISA板應該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間性能相近。

  2、包被

  ①板孔的選擇：ELISA級別的微孔板

  ②抗體選擇：選擇支持ELISA實驗的抗體，根據推薦濃度稀釋或摸索適濃度

  ③包被緩沖液：pH9.6碳酸鹽緩沖液或pH7.2磷酸鹽緩沖液

  ④包被溫度：2-8 ℃過夜包被或室溫(37℃)包被2h

  ⑤包被濃度：包被濃度隨載體和包被物的性質可有很大的變化。一般包被濃度為10ug/ml-20ug/ml。

  3、封閉

  ①包被之后一定要立即封閉(封閉非特異性抗體)

  ②選擇效果較好的封閉劑(細胞培養級BSA、Tween等)

  4、加樣及孵育

  ①加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡。

  ②孵育的時間及溫度參考試劑盒說明書。如有條件，建議加樣孵育時使用shaker震蕩儀，推薦軌道直徑3mm，轉速在500±50rpm;

  ③檢測抗體、酶標物的稀釋比例、孵育溫度、孵育時間嚴格根據說明書提示;

  ④洗板對于ELISA來說，是極其關鍵的一步，保證ELISA的特異性

  ⑤封板膜一定要一次一換，切勿二次甚至多次使用，以防交叉污染

  5、顯色和終止

  ①使用前需檢查，底物在加入96孔板之前應為無色透明

  ②顯色底物需現配現用，避免污染

  ③孵育時間，說明書上為參考范圍，但具體需要根據實驗條件自行摸索。

  Elisa試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。