間接法操作elisa試劑盒

  間接法可用于檢測未知抗體的elisa試劑盒

  elisa試劑盒步驟如下：

  1.首先用包被緩沖液將已知抗原稀釋到1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜;

  2.第二日日洗滌3次;

  3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;

  4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml;

  5.37℃孵育30-60分鐘，洗滌; 后一遍用DDW洗滌。elisa試劑盒

  6.加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

  7.終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

  8.結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。elisa試劑盒

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