β-半乳糖苷酶(β-GAL)活性檢測試劑盒技術說明書

  產品規格：50管/24樣

  產品內容：

  溶液的配制：

  1. 試劑一：臨用前每瓶加入5mL雙蒸水，充分溶解備用;用不完的試劑仍-20℃保存。

  2. 標準品：5μmol/mL的對硝基苯f溶液。

  產品說明：

  β-GAL(EC 3.2.1.23)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，能夠催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷鍵水解，此外還具有轉半乳糖苷的作用。β-GAL不僅可為植物的快速生長釋放儲存的能量，還能在正常的多糖代謝、細胞壁組分代謝以及衰老時細胞壁降解過程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖殘基的水解，釋放自由的半乳糖。

  β-GAL分解對-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成對-硝基苯f，后者在400nm有大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算β-GAL活性。

  注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。

  需自備的儀器和用品：

  可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

  操作步驟：

  一、樣本處理(可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻)

  1. 細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個)：提取液體積(mL)為500~1000：1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液)，超聲波破碎細菌或細胞(冰浴，功率20%或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次);15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

  2. 組織：按照組織質量(g)：提取液體積(mL)為1：5~10的比例(建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液)，進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

  二、測定步驟：

  1. 分光光度計預熱30min以上，調節波長至400nm，蒸餾水調零。

  2. 標準液的處理：用蒸餾水將標準液稀釋至200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/mL。

  3. 樣本測定(在EP管中依次加入下列試劑)：

  三、β-GAL活性計算：

  1. 標準曲線的建立：

  根據標準管的吸光度(x，減去濃度為0的標準管OD值)和濃度(y，nmol/ml)建立標準曲線， 將△A帶入標準曲線中，計算樣品生成的產物量(nmol/ml)。

  2. β-GAL活性計算：

  (1)按樣本蛋白濃度計算：

  單位的定義：每mg組織蛋白每小時產生1nmol對-硝基苯f定義為一個酶活力單位。

  β-GAL活力(nmol/h /mg prot)=(y×V反總)÷(V樣×Cpr)÷T

  =20×y÷Cpr

  蛋白濃度需要另外測定。

  (2)按樣本鮮重計算：

  單位的定義：每g組織每小時產生1nmol對-硝基苯f定義為一個酶活力單位。

  β-GAL活力(nmol/h /g鮮重)=(y×V反總)÷(W×V樣÷V樣總)÷T

  =20×y ÷W

  (3) 按細菌或細胞密度計算：

  單位的定義：每1萬個細菌或細胞每小時產生1nmol對-硝基苯f定義為一個酶活力單位。

  β-GAL活力(nmol/h /104 cell)= (y×V反總)÷(500×V樣÷V樣總)÷T

  =0.04×y

  Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL;V反總：反應體系總體積，0.5mL;V樣：加入反應體系中樣本體積，0.05mL;V樣總：加入提取液體積，1mL;W：樣本質量，g;500：細胞或細菌總數，500萬;T：反應時間，0.5h。

  β-半乳糖苷酶檢測試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。