實驗技巧：ELISA實驗中緩沖溶液及試劑的配置要求

  elisa實驗中是以抗原和抗體的免疫反應為基礎，ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實驗，把各種ELISA配置方法匯總如下：(1) ELISA實驗包被緩沖液(2) ELISA實驗洗滌緩沖液(2) ELISA實驗洗滌緩沖液(3) ELISA實驗稀釋液;(4)ELISA實驗終止液(5)ELISA底物緩沖液(6)ELISA實驗TMB(四甲基聯苯胺)使用液(7) ELISA實驗ABTS使用液(8)ELISC。古朵生物為您具體解析：

  試劑

  (1) ELISA實驗包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):

  NaHCO3 1.59克

  NaHCO3  2.93克

  加蒸餾水至1000ml

  (2) ELISA實驗洗滌緩沖液(PH7.4 PBS)：0.15M

  KH2PO4     0.2克

  Na2HPO4·12H2O  2.9克

  NaCl      8.0克

  KCl     0.2克

  Tween-20 0.05%  0.5ml

  加蒸餾水至1000ml

  (3) ELISA實驗稀釋液：

  牛血清白蛋白(BSA) 0.1克

  加洗滌緩沖液至100ml

  或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。

  (4) ELISA實驗終止液(2M H2SO4)：

  蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。

  (5) ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):

  0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml

  0.1M 檸檬酸(19.2克/L)   24.3ml

  加蒸餾水50ml。

  (6) ELISA實驗TMB(四甲基聯苯胺)使用液:

  TMB(10mg/5ml無水乙醇) 0.5ml

  底物緩沖液(PH5.5)   10ml

  0.75%H2O2 32μl

  (7) ELISA實驗ABTS使用液:

  ABTS   0.5mg

  底物緩沖液(PH5.5)  1ml

  3%H2O2 2μl

  (8)ELISA實驗封閉液：

  牛血清白蛋白(BSA) 5克

  加洗滌緩沖液至100ml。

  值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。

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  為了保證ELISA實驗的準確性，實驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要，將洗滌液加入酶標板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標孔，嚴防交叉污染。

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