雞球蛋白(GLB)elisa試劑盒說明書

  本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫學診斷

  雞(Chicken)球蛋白(GLB)ELISA檢測試劑盒

  使用說明書

  檢測原理

  試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被球蛋白(GLB)抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的球蛋白(GLB)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值)，計算樣品濃度。

  樣品收集、處理及保存方法

  1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

  2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

  3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

  4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

  5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

  自備物品

  酶標儀(450nm)

  加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

  37℃恒溫箱

  操作注意事項

  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶*溶解后再使用。

  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封(低溫干燥)保存。

  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍，終結果乘以5才是樣本實際濃度。

  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

  所有液體組分使用前充分搖勻。

  試劑盒組成

  名稱96孔配置48孔配置備注

  微孔酶標板12孔×8條12孔×4條無

  標準品0.3mL*6管0.3mL*6管無

  樣本稀釋液6mL3mL無

  檢測抗體-HRP10mL5mL無

  20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋

  底物A6mL3mL無

  底物B6mL3mL無

  終止液6mL3mL無

  封板膜2張2張無

  說明書1份1份無

  自封袋1個1個無

  注：標準品(S0-S5)濃度依次為：0、2.5、5、10、20、40 g/L

  試劑的準備

  20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

  洗板方法

  手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

  自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

  操作步驟

  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

  樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

  每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

  結果判斷

  繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

  試劑盒性能

  性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。

  靈敏度：ZD檢測濃度小于1.0 g/L。

  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

  重復性：板內、板間變異系數均小于15%。

  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

  有效期：6個月

  免責聲明

  試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。

  嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。

  ELISA 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。