古朵帶您了解、ELISA試劑盒檢測方法的由來和原理

  酶聯免疫檢測技能(elisa試劑盒檢測辦法)是20世紀60年代晚期發展起來的一種免疫學檢測辦法，是現在zui廣泛使用的符號免疫技能。1966年Nakene和Pierce一起發表了《酶標抗體：制備和抗原定位中的使用》，首要提出了酶聯免疫技能(ELISA試劑盒檢測辦法)的基本原理。1971年Engvall和Perlmann發表《ELISA KIT辦法吸附實驗測定IgG含量》一文，使酶聯免疫(ELISA試劑盒檢測)技能成為一種有用的檢測液體標本中微量物質的辦法。現在酶聯免疫(ELISA試劑盒)檢測技能已廣泛用于免疫學、微生物學、寄生蟲學等。因為其具有靈敏度高、試劑安穩、設備簡略、操作安全等長處，近幾年也將其使用到食物領域中來檢測某些食物中的生理活性物質。

  一、基本概念

  1、免疫：抽象地歸納起來，免疫就是人和動物機體防御、掃除外來物質(異物)進人體內，一起識別和鏟除體內逝世、變性物質和平定體內叛亂分子驟變細胞，以維護和安穩本身的防護機制。

  2、抗原：抗原是指那些可以誘導機體的免疫系統發作免疫應對，發作抗體和致敏效應淋巴細胞，并在體表里與之特異性結合，發作免疫反響的物質。

  3、抗體：是能與相應的抗原專一性結合的蛋白質分子，和機體其他生物大分子相同是細胞的產品，排泄到體液中或表現在細胞表面上。

  4、抗原、抗體反響：抗原和抗體在體外的反響亦稱血清學反響。這類反響可憑借免疫學辦法進行檢測。

  二、抗體定量檢測辦法及其原理

  定量分析抗體的常用辦法有分散法、酶聯免疫吸附法和火箭免疫電泳法等。

  1、免疫分散法

  a、單向免疫分散法

  原理：將待檢抗原滴加于含相應抗體的瓊脂板小孔中，經必定時刻分散后。構成乳白色的沉積壞，在必定濃度范圍內，抗原的含量與沉積壞直徑成正比。可以先用己知不同濃度的規范抗原制成規范曲線，再依據測驗樣品沉積環直徑的巨細，從規范曲線上查出樣品中抗原的相應含量。

  b、雙向免疫分散法

  原理：可溶性抗原與已知可溶性抗體分別參加相鄰的瓊脂糖凝膠板上的小孔內，在電解質存在下讓它們相互向對方分散。當兩者在zui恰當份額處相遇時，即構成一條明晰的沉積線。依據稀釋度與已知規范品稀釋度之比，可核算出抗體含量。

  2、火箭免疫電泳法

  原理：抗原在電場力的效果下向前移動，當抗原在通過含有必定量單一抗體的瓊脂凝膠時，即構成抗原抗體復合物，份額適宜即沉積下來。因抗體遷移率低，而抗原隨電泳向前移動，因而使抗原、抗體構成圓錐形的沉積峰。在必定濃度范圍內，峰的高度與抗原的濃度呈正比。

  3、酶聯免疫吸附法(ELISA)

  原理：ELISA可用于測定抗體，也可用于檢測杭原。其基本原理是選用抗原與抗體的特異反響將待測物與酶銜接，然后通過酶與底物發作色彩反響，用于定量測定。測定的對象可所以抗體也可所以抗原。3種必要的試劑： ①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑); ②酶符號的抗原或抗體(符號物); ③酶效果的底物(顯色劑)。

  ELISA進程包括：抗原吸附在固相載體上，這個進程稱為包被，加待測抗體, 再加相應酶符號抗體，生成抗原--待測抗體--酶符號抗體的復合物，再與該酶的底物反響生成有色產品。憑借分光光度計的光吸收核算抗體的量。

  依據檢測目的和操作過程不同，有以下三種類型的常用辦法：

  a、間接法

  此法是測定抗體zui常用的辦法。將已知抗原吸附于固相載體。加人待檢標本(含相應抗體)與之結合。洗刷后，加人酶標抗球蛋白抗體(酶標抗抗體)和底物進行測定。

  b、雙抗體夾心法

  此法常用于測定抗原。將已知抗體吸附于固相載體，加人待檢標本(含相應抗原)與之結合。溫育后洗刷，加人酶標板中。

  c、競爭法

  此法可用于抗原和半抗原的定量測定，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，將特異性抗體吸附于固相載體。參加待測抗原和必定量的酶標已知抗原，使二者竟爭與固相抗體結合;通過洗刷別離，zui后結合于固相的酶標抗原與待測抗原含量呈負相關。

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