古朵小課堂：ELISA試劑盒為什么重復性差?

  主要有兩方面：

  一是實用性，看看你這方法是否實用，是否能夠推廣，如果你只想在自己的實驗室用一用，也可不必考慮這一方面;

  二是可靠性，評價可靠性的主要指標有檢測限、線性范圍、回收率、重復性與重現性等等。可靠性是必須評價的。

  ELISA試劑盒重復性與重現性的區別與聯系?

  重復性(repeatability)與重現性(再現性，reproducibility)，二者都是用來評價分析結果的度。大多數人都不作嚴格區分，有的文獻中還常常混用。但是二者的實際意義是不一樣的。

  重復性：是指同一分析人員在同一條件下所得分析結果的度，

  重現性：是指不同分析人員或不同實驗室在各自的條件下所得分析結果的度。也就是說，重現性比重復性提出了高的要求。重復性好，重現性未必好。而重現性好，重復性肯定好。二者都是用多次分析結果的RSD來表示。

  對現代儀器分析而言，重復性是容易實現的，而重現性是重要的，也是方法驗證必須考察的。

  方法的重現性包括連續多次進樣分析的重復性、不同天數間的重復性、不同型號儀器間的重現性和不同實驗室間的重現性。

  可能存在的原因有：

  1. 試劑盒儲存不當或儲存環境差。您應按照數據表上的建議儲存所有組分，而不是在室溫下過長時間。

  2. 標準的制備不正確。您應根據試劑盒的方案，使用推薦的稀釋劑嚴格重構標準。在使用前的10分鐘內準備好試劑，并迅速加入孔中。

  3. 添加樣本后混勻不充分。當同時添加多個試劑時，您應在渦旋混合器中充分混合試劑。在持有試劑時要小心，避免濺出。

  4. 孔讀數重復性差。您應校準酶標儀。

  5. 孵育時間、洗滌條件、顯色條件和操作者不一致。您應重復標準的實驗。確保反應條件和操作者一致。

  6. 洗滌不當。您應使用移液管加入200μL的洗滌緩沖液，或者用移液管充分填滿每個孔，但不允許溢出。檢查酶標板洗滌器的所有孔口，確保充分的洗滌。

  7. 溫度不均勻。您應在孵育期間保持恒定溫度，避免溫度波動。

  8. 加樣本時壁面殘留過多或移液管尖劃傷孔底。您應緩慢、小心地將移液管尖沿孔壁降低，避免觸碰孔底。

  9. 重復使用材料。您應在樣本之間換移液管尖，在試劑之間換儲液器。

  10. 偶爾在截斷值附近出現的陽性和陰性值。您應對同一樣本設置3個重復測量，并在2個樣本中獲得相同的結果。

  11. 加樣本時的交叉污染。您應在添加樣本時避免交叉污染。

  ELISA試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。古朵試劑盒