對科學家而言不僅是工具：論胰蛋白酶在實驗室的重要性

生li學家認為，胰蛋白酶等絲氨酸蛋白酶是存在于消化液中穩定、關鍵的蛋白消化酶。Z早關于胰蛋白酶的描述是在19世紀末期，胰蛋白酶Z初作為胰蛋白酶原形成于胰腺，然后通過胰腺管到達十二指腸并剪切為活性形式。酶活性的封存可防止體蛋白的無選擇、不合需求的剪切，避免引起炎癥疾病如胰腺炎。

具有貼壁表型的細胞培養物

胰蛋白酶是一個有力的特異分子工具，在生命科學家的手中實現精que的蛋白剪切。關于胰蛋白酶在細胞培養中的應用報告Z早出現于50多年以前。在細胞培養中，與胰蛋白酶短期孵育可以剪切蛋白，將貼壁培養細胞從培養平面和其他細胞上解離下來，從而將細胞從培養瓶、培養皿和培養板上移除，構建單細胞懸液用于細胞計數、細胞傳代和其他下游實驗。

 

特定應用的胰蛋白酶：請更穩定一些

除了細胞培養,胰蛋白酶在生命科學領域還有很多其他用途。比如在蛋白質組學實驗中，胰蛋白酶可將蛋白消化成多肽用于質譜分析。在此應用中，胰蛋白酶的特異性尤其有用，因為它斷裂只是羧基在精氨酸或賴氨酸殘基上的肽鍵。

然而，胰蛋白酶消化蛋白的異常活性有時也會給蛋白質組學研究帶來一些問題。如果不采取穩定措施，胰蛋白酶Z終會進行自我消化，這是大家Z不希望看到的，因為自我裂解可能污染和混淆實驗結果。為了穩定質譜應用的胰蛋白酶，減少自身消化碎片產生的峰，科學家們研發出了高純的重組胰蛋白酶配方“SOLu-trypsin”（EMS0004），一款的蛋白質組學級別的胰蛋白酶。“SOLu-trypsin”胰蛋白酶經過改良后不會進行自我剪切，不會產生污染質譜結果的胰蛋白酶片段，這是蛋白質組學研究的福音。


細胞培養新福利：一款適用于常規解離的熱穩定配方

要為細胞培養應用開發不自我剪切的熱穩定性胰蛋白酶非常容易，為什么要為常規的細胞培養應用開發一款不同的穩定胰蛋白酶配方呢？在蛋白質組學研究中，避免使用可能污染質譜結果的添加劑來穩定胰蛋白酶是非常必要的，但對細胞培養來說，其面臨的問題是不同的。但細胞培養過程中，真正困擾研究人員的是繁瑣的胰蛋白酶凍融流程：解凍儲存的胰蛋白酶、分裝成單次使用量、凍存分裝試劑、亞培養時再次解凍，這意味著科學家Z需要的是在冰箱外能保持穩定、在廣泛的實驗室溫度條件下仍具有活性的胰蛋白酶配方。

新配方StableCell?胰蛋白酶不僅在4°C條件下穩定，而且在室溫條件下也是穩定的，甚至在37°C條件下仍能保持>90%的活性。StableCell?胰蛋白酶有3個不同的濃度(1x、5x和10x)，可根據不同的細胞粘附強度進行優化。而且與其他室溫解離試劑不同，這個新配方仍是豬胰腺胰蛋白酶，不需要在之前使用傳統胰蛋白酶配方的培養系統中再次進行驗證。


讓你的應用成為你的指南：為什么胰蛋白酶的配方不盡相同？

許多實驗室可能不管其應用是什么，都直接購買Z常用的胰蛋白酶配方：0.25%胰蛋白酶+EDTA，再加入酚紅作為pH指示劑。盡管不是典型的解離大部分貼壁細胞的強大試劑，但當EDTA加入胰蛋白酶后提供了一種解離細胞的協同機制：EDTA結合移除細胞-表面以及細胞-細胞間的鈣，螯合培養基中抑制胰蛋白酶活性的游離Ca2+，從而降低胰蛋白酶的使用濃度，避免高濃度胰蛋白酶或過度孵育對細胞的傷害。胰蛋白酶在pH 7-9 范圍內具有zui佳活性，因此配方中通常使用酚紅作為pH指示劑。然而，有些特殊應用則需要選擇不含EDTA或酚紅的配方。

選擇和使用技巧：生命科學應用的胰蛋白酶配方

為實現zui佳的細胞解離效果，下述技巧可幫助選擇正確的胰蛋白酶配方：

? 對于存在較高自身消化片段和污染物峰風險的蛋白質組學研究，通過分子改進（如重組配方）方法實現穩定的胰蛋白酶是zui佳選擇。
? 在常規細胞培養應用中使用熱穩定性胰蛋白酶配方可避免繁瑣的凍融分裝流程，避免出現丟棄不小心落在冰箱外的標準胰蛋白酶而產生的浪費。
? 標準和熱穩定性胰蛋白酶配方通常都具有不同的胰蛋白酶濃度，使用為你的細胞推薦的Z低有效濃度。