標(biāo)簽：半定量RT-PCR 古朵生物 定量RT-PCR

  半定量RT-PCR和定量RT-PCR的區(qū)別

  定量PCR較半定量準(zhǔn)確，可實(shí)時(shí)定量。理論上有1個(gè)copy的差別就能區(qū)分開。如果你只想看看大致趨勢(shì)，半定量不失為一種快速的方法。現(xiàn)在一些別的刊物上還有半定量的結(jié)果，如plant cell, plant physiology, genome biology等。

  半定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(semi-quantitatie reerse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-PCR)是近年來常用的一種簡(jiǎn)捷、特異的定量RNA測(cè)定方法，通過mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并測(cè)定PCR產(chǎn)物的數(shù)量，可以推測(cè)樣品中特異mRNA的相對(duì)數(shù)量。以半定量RT-PCR為基礎(chǔ)建立起來的mRNA含量測(cè)定技術(shù)，較含內(nèi)標(biāo)化的RT-PCR定量測(cè)定的mRNA的方法geng為簡(jiǎn)便可行。這種方法不另設(shè)‘內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)',排除了倆對(duì)不同引物之間的相互抑制和靈敏讀差異，而且具有明顯的劑量-效益關(guān)系和良好的重復(fù)性。

  步驟，1。抽提RNA，2。反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，3。以cDNA為模板做PCR!

  注意：步驟1，RNA抽提質(zhì)量一定要好，注意污染。內(nèi)參的選擇，常用的有βactin和GAPDH倆中。步驟3，半定量RT-PCR應(yīng)該再兩管中進(jìn)行，既內(nèi)參和目的基因各一管，這樣便于控制，做圖的時(shí)候可以放在一各泳道里跑!指數(shù)期和平臺(tái)期一定要摸清楚!

  定量RT-PCR(quantitatie reerse transcription and polymerase Chain reaction ,qRT-PCR)是在用一步法或兩步法，在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。有相對(duì)定量和dui定量?jī)煞N分析方法，dui定量的目的是測(cè)定目的基因在樣本中的分子數(shù)目，即通常所說的拷貝數(shù)。相對(duì)定量的目的是測(cè)定目的基因在兩個(gè)或多個(gè)樣本中的含量的相對(duì)比例，而不需要知道它們?cè)诿總€(gè)樣本中的拷貝數(shù)。另外，與傳統(tǒng)的PCR技術(shù)相比，Real-time Q-PCR的不足之處是：

  (1)由于運(yùn)用了封閉的檢測(cè)，減少了擴(kuò)增后電泳的檢測(cè)步驟，因此也就不能監(jiān)測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物的大小;(2)因?yàn)闊晒馑胤N類以及檢測(cè)光源的局限性，從而相對(duì)地限制了real-time Q-PCR的復(fù)合式(multiplex)檢測(cè)的應(yīng)用能力;

  (3)目前real-time Q-PCR實(shí)驗(yàn)成本比較高，從而也限制了其廣泛的應(yīng)用。

  半定量RT-PCR和定量RT-PCR的區(qū)別上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求”的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量”的方針。