天天色播-欧美综合一区-特黄三级又爽又粗又大-久久a级片-人人干av-av在线日韩-欧美在线不卡视频-人体av-欧美在线二区-免费高清毛片-丰满少妇高潮在线观看-奇米第四色7777-国产肉体ⅹxxx137大胆-男女视频国产-制服 丝袜 激情 欧洲 亚洲-天天操天天舔天天干-中国精品毛片-免费看黄色一级大片-成人涩涩网站-成人试看120秒体验区-亚洲区第一页-生活片av-国产一区99-樱桃国产成人精品视频-国产自在自拍

主營產品: 科研人類ELISA試劑盒說明書,大鼠ELISA試劑盒代測,小鼠ELISA試劑盒廠家
產品分類

公司名稱:上海古朵生物科技有限公司

公司地址:上海市嘉定區曹安公路5588號

郵政編碼:

公司電話:18321664727

公司傳真:

電子郵件:272967093@qq.com

聯 系 人:洛辰 ( 女士 )

部門(職位):

手機號碼:13621980056

即時通訊:        

公司新聞

怎么建穩轉株才能真的穩?

發布時間:2021-11-18 閱讀:538

穩定轉染,即進入細胞的質粒整合入細胞基因組中,并能隨細胞分裂穩定傳遞下去。這是相對瞬時轉染而言的。

瞬時轉染的表達時間短暫,外源基因導入整合基因組的幾率非常低,絕大部分以游離形式存在,不能隨細胞分裂而一同復制,導致后拷貝數被稀釋,無法達到持續表達外源基因的目的。一般用轉染試劑進行質粒轉染,多為瞬時轉染。

一般如下情況需要構建穩定株:

1) 長期在目的細胞中研究基因功能,通過構建穩定株,可以大大降低頻繁轉染或者病毒包裝的成本,也極大方便實驗研究;

2)部分蛋白半衰期極長,瞬時RNA只能干擾表達,無法去除已經表達的目的蛋白,通過構建穩定株可以實現好的基因干擾效果;

3)瞬轉往往會引入極高拷貝數的表達,導致因為人為因素造成實驗結果的不,構建穩定株可以幫助篩選拷貝數適量的細胞進行實驗研究;

4)需要用誘導表達系統的,主要是一些致死基因或者是需要時空表達的;

5)需要用細胞做動物實驗的,比如裸鼠成瘤等,往往需要構建成穩轉株。

構建穩定株的方法:

其實用脂質體轉染、磷酸鈣轉染法等理論上是可以構建穩定株的,但這些方法整合入基因組的效率極低,很難成功。而慢病毒可以攜帶外源基因隨機整合進基因組,效率很高,是建立穩定株的優方式。

構建穩定株的注意點:

穩定株構建是個長期過程,從質粒構建到慢病毒包裝,再到細胞感染及后期的篩選,每一步都至關重要,所以建立穩轉株花個半年時間,也是常有的事,而且要承擔病毒包裝不成功,細胞感染效率低等風險。

在線客服

聯系人:洛辰
QQ:
電話:18321664727
手機:13621980056