影響酪胺的多重熒光 IHC 實驗成功的因素有很多。

一抗濃度： 多重小圖中每種一抗的佳稀釋度必須憑經驗確定，并且通常可能與制造商建議的稀釋度存在很大不同，因為酪胺沉淀會引起熒光信號擴增。我們強烈建議使用中等強度的熒光團對每種組分進行滴定，來優化多重檢測板的個別組分。

順序優化： 優化對組織切片應用多重小圖中的抗體順序，以確保多輪加熱不會損壞靶標特異性表位，這點非常關鍵。我們建議使用中等強度的熒光團來檢測多重檢測板每個窄縫中的所有優化一抗，以確保熒光信號不受檢測板內相對位置的影響。

抗體-熒光團配對： 通常，使用亮的熒光團檢測表達低的靶標來配對抗體，這是一種很好的做法。我們建議檢測由優化的一抗組成的基質和每種可用的熒光團，以獲得檢測板上每種靶標的佳信號強度和信噪比。