標(biāo)簽：血清總補(bǔ)體溶血活性 古朵生物 綿羊紅細(xì)胞

  血清總補(bǔ)體溶血活性(CH50)測(cè)定操作說(shuō)明

  血清總補(bǔ)體溶血活性(CH50)實(shí)驗(yàn)原理 利用綿羊細(xì)胞與相應(yīng)抗體(溶血素)結(jié)合成的復(fù)合物，可激活血清中的補(bǔ)體，導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解，當(dāng)紅細(xì)胞和溶血素量一定時(shí)，在規(guī)定反應(yīng)的時(shí)間內(nèi)，溶血程度與補(bǔ)體量及活性呈正相關(guān)。在接近50%溶血(CH50)時(shí)，二者之間近似直線關(guān)系，故以50%溶血作為敏感的判斷終點(diǎn)。以引起50%溶血所需的小補(bǔ)體量為一個(gè)CH50U，可計(jì)算出待測(cè)血清中總的補(bǔ)體溶血活性，以CH50U/ml表示。

  本試驗(yàn)主要反映補(bǔ)體經(jīng)典活化途徑的溶血功能，其結(jié)果與補(bǔ)體C1～C9各組成分的量及活性均有關(guān)。

  1.試劑及配制

  (1)緩沖生理鹽水：

  ①貯存液： lNa2HPO4?12H2O 2.85g lKH2PO4

  0.27g(加蒸餾水至100毫升，4℃保存) lNaCl17.00g

  ②應(yīng)用液(緩沖液)：5毫升貯存液加95毫升蒸餾水，再加10%硫酸鎂0.1毫升。當(dāng)日配制。12小時(shí)內(nèi)使用。

  (2)2%綿羊紅細(xì)胞：無(wú)菌采取綿羊血液，于等量Alsever液中可保存3周。用前以緩沖液洗3次，并配成2%細(xì)胞懸液。必要時(shí)可用吸光光度法或細(xì)胞計(jì)數(shù)法使懸液細(xì)胞濃度標(biāo)準(zhǔn)化。

  (3)凍干綿羊紅細(xì)胞溶血素(規(guī)格：0.5ml/瓶，0.5ml蒸餾水復(fù)溶)：將本品(效價(jià)1：4000)，用緩沖液作1：2000倍稀釋(即0.5ml溶血素加999.5毫升緩沖液)。

  (4)待測(cè)血清：新鮮血液室溫放置30分鐘，再4℃放置60分鐘，使血塊收縮。4℃離心(3000r/min)10分鐘，取上清，-20℃保存。

  2.試管法操作步驟(改良Mayer法)

  (1)致敏羊紅細(xì)胞：2%綿羊紅細(xì)胞加等量稀釋后的溶血素(1：2000)，混勻，置37℃水浴30分鐘。

  (2)稀釋血清：待測(cè)血清0.2ml，加緩沖液3.8ml，稀釋度為1：20。

  (3)配制溶血標(biāo)準(zhǔn)管：2%綿羊紅細(xì)胞2ml加8ml蒸餾水，混勻，即為全溶血管。取全溶血管液2ml加緩沖液2ml，即為50%溶血管。

  (4)按表所示，依次加各成分于試管中，混勻，置37℃水浴30分鐘。第10管為非溶血對(duì)照。

  (5)結(jié)果測(cè)定：取出試管，2000r/min離心10分鐘，對(duì)照管應(yīng)不溶血。肉眼比色，選與50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管相近二管，再用分光光度計(jì)測(cè)(波長(zhǎng)542nm、0.5cm比色杯)OD值，確定與標(biāo)準(zhǔn)管接近者為終點(diǎn)管，然后按下公式計(jì)算CH50值：血清補(bǔ)體CH50(U/ml)=(1/血清用量)×稀釋度。 如第5管為終點(diǎn)管，測(cè)待測(cè)血清中CH50為66.7U/ml。血清補(bǔ)體CH50正常值為50-100U/ml。

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