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細菌簡單染色實驗方法@古朵新聞

發布時間:2022-12-28 閱讀:291

  簡單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法。此法操作簡便,適用于菌體一般形狀和細菌排列的觀察。

  古朵詳述實驗方法原理:

  常用堿性染料進行簡單染色,這是因為:在中性、堿性或弱酸性溶液中,細菌細胞通常帶負電荷,而堿性染料在電離時,其分子的染色部分帶正電荷(酸性染料電離時,其分子的染色部分帶正電荷)。因此堿性染料的染色部分很容易與細菌結合使細菌著色。經染色后的細菌細胞與背景形成鮮明的對比,在顯微鏡下易于識別,常用作簡單染色的染料有:美藍、結晶紫、堿性復紅等。

  當細菌分解糖類產酸使培養基pH下降時,細菌所帶正電荷增加,此時可用伊紅、酸性復紅或剛果紅等酸性染料染色。

  實驗材料:

  枯草芽孢桿菌(12-18 h營養瓊脂斜面培養物)藤黃微球菌(約24 h營養瓊脂斜面培養物)

  試劑、試劑盒:

  呂氏堿性美藍染液/草酸按結晶紫染液齊氏石-炭酸復紅染液

  儀器、耗材:

  顯微鏡酒精燈載玻片接種環雙層瓶(內裝香柏油和二甲-苯)擦鏡紙生-理鹽水

  實驗步驟:

  1.涂片

  取兩塊載玻片,各滴一小滴(或用接種環挑取1~2環)生-理鹽水(或蒸餾水)于玻片中央,用接環以無菌操作(圖IV-1)分別從枯草芽泡桿菌和藤黃微球菌斜面上挑取少許菌苔于水滴中,混勻井涂成薄膜。若用菌懸液(或液體培養物)涂片可用接種環挑取2~3環直接涂于載玻片上。

  2.干燥

  室溫自然干燥。

  3.固定

  涂面朝上,通過火焰2~3次。

  此操作過程稱熱固定,其目的是使細胞質凝固,以固定細胞形態。并使之牢固附著在載玻片上。

  4.染色

  將玻片平放于玻片擱架上,滴加染液于涂片上(染液剛好覆蓋涂片薄膜為宜)。呂氏堿性美藍染色1~2 min,石-炭酸復紅(或草酸銨結晶紫)染色約1 min。

  5.水洗

  倒去染液。用自來水沖洗,直至涂片上流下的水無色為止。

  6.干燥

  自然干燥,或用電吹風吹干,也可用吸水紙吸干。

  7.鏡檢

  涂片干后鏡檢。

  注意事項:

  1.載玻片要潔凈無油斑,滴生-理鹽水和取菌不宜過多,涂片要涂抹均勻。不宜過厚。

  2.熱固定溫度不宜過高(以玻片背面不燙手為宜),否剿會改變甚至破壞細胞形態。

  3.水洗時不要直接沖洗涂面,而應使水從載玻片的一端流下。水流不宜過急、過大,以免涂片薄膜脫落。

  4.涂片必須完全干燥后才能用油鏡觀察。

  細菌簡單染色實驗方法上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品,勵志研發和銷售的綜合性生物公司,產品遠銷多個國家和地區,我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向,不斷開發高質量的新產品,提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針

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