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古朵新聞:小鼠IgGELISA試劑盒的實驗方法

發布時間:2023-04-17 閱讀:262

  小鼠IgGELISA試劑盒的實驗方法:

  基本原理:

  本實驗采用雙抗體夾心ELISA法。用抗小鼠IgG單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的IgG與單抗結合,加入酶標抗體,形成免疫復合物連接在板上,加入酶底物TMB,出現藍色,加終止液硫酸,顏色變黃,在450nm處測OD值,IgG濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中IgG濃度。

  小鼠IgGELISA試劑盒操作步驟:

  實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。

  1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

  2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜,37℃反應60分鐘。

  3.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

  4.每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液)100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

  5.溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

  6.依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

  7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

  8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。

  小鼠IgGELISA試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品,勵志研發和銷售的綜合性生物公司,產品遠銷多個國家和地區,我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向,不斷開發高質量的新產品,提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。

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