ELISA試劑盒操可能會(huì)出現(xiàn)的問(wèn)題及解決辦法

  >> 問(wèn)題顯色淡，靈敏度偏低

  可能原因

  1、試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長(zhǎng)，溫度太高

  2、試劑盒未充分平衡

  3、培養(yǎng)箱溫度不足37℃

  4、保溫時(shí)間不足

  5、洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、洗滌次數(shù)增加

  6、移液器吸液量不足，吸嘴內(nèi)壁掛水太多或內(nèi)壁不清潔

  7、蒸餾水水質(zhì)有問(wèn)題

  8、底物作用時(shí)間不足

  問(wèn)題可能原因解決方法

  盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間，夏季應(yīng)放冰塊降溫

  試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開(kāi)盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫(約25℃)。

  注意培養(yǎng)箱溫度，放入反應(yīng)板后盡量減少開(kāi)啟次數(shù)以免影響溫度恒定，非隔水式培養(yǎng)箱尤其應(yīng)注意

  校正定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)

  按試劑盒說(shuō)明書要求保留洗滌時(shí)間，準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)

  校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時(shí)要緊密，吸嘴內(nèi)壁要清潔，好一次性使用

  使用新鮮合格的蒸餾水

  準(zhǔn)確定時(shí)

  >> 背景深，全部呈有色

  可能原因

  1、洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留

  2、樣品污染

  3、培養(yǎng)箱溫度超過(guò)37℃或反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

  4、吸嘴重復(fù)使用，未洗凈或消毒不

  5、蒸餾水被污染

  6、酶等試劑混用

  7、一次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本量過(guò)多，加樣時(shí)間太長(zhǎng)，導(dǎo)致實(shí)際反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)

  解決方法

  濃縮洗液準(zhǔn)確配制;10倍濃縮洗滌液如有結(jié)晶則應(yīng)讓結(jié)晶于室溫全部溶解后再量取稀釋;充分洗滌，拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染

  樣品應(yīng)新鮮采集，或低溫保存，防止污染

  調(diào)整培養(yǎng)箱溫度，準(zhǔn)確定時(shí)

  吸嘴盡可能一次性使用

  使用新鮮蒸餾水

  不同批號(hào)試劑勿混用

  合理安排實(shí)驗(yàn)，避免幾塊酶標(biāo)板同時(shí)加樣

  >> 重復(fù)性不佳

  可能原因

  1、樣品數(shù)量多少不一，加樣時(shí)間有長(zhǎng)有短

  2、保溫時(shí)間不一致，洗滌條件不一致，操作人員不一致

  3、加樣量不一致

  解決方法

  重復(fù)某一樣品時(shí)，加樣時(shí)間盡可能與次接近

  重復(fù)測(cè)定標(biāo)本，操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性

  樣品稀釋前應(yīng)充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴

  >> 出現(xiàn)白板，陽(yáng)性對(duì)照不顯色

  可能原因

  1、顯色液變質(zhì)

  2、洗滌液配制有誤

  3、未加酶結(jié)合物而認(rèn)為已加入

  4、終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜镆菏褂?

  解決方法

  換新的顯色液

  請(qǐng)按試劑盒說(shuō)明書所示稀釋倍數(shù)配制

  注意不要漏加

  每次加液前均應(yīng)看清標(biāo)簽

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