酶聯(lián)免疫檢測的幾種方法及其原理

  (1)酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)：是將抗原或抗體吸附在固相載體表面。使抗原抗體反應(yīng)在固相載體表面進行?？捎瞄g接法、雙抗體夾心法或競爭法測定抗原或抗體。

  (2)夾心法(sandwichassay):將已知的特異抗體包裝在固相載體(塑料板凹孔或紙片上)，加入待檢標(biāo)本，標(biāo)本中的抗原即可與載體上的抗原結(jié)合，洗去未結(jié)合的材料后加入該抗原的酶標(biāo)記抗體，洗去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體，加底物顯色，用酶免疫檢測儀測量顏色的光密度，可定量測定抗原。

  間接法(indirecrELISA)常用于檢查特異抗體。先將已知特異抗原包被固相載體，加入待檢標(biāo)本(可能含有相應(yīng)抗體)，再加入酶標(biāo)抗Ig的抗全(即第二抗體)，經(jīng)加底物顯色后，根據(jù)顏色的光密度計算出標(biāo)本中抗體的含量。

  (3)BAS-ELISA：近年來對酶免設(shè)分析法的改進是使用生物素-親合素-過氧化物酶復(fù)合物作為指示劑，組成一新的生物放大系統(tǒng)進一步提高檢測的敏感度?？捎脕頇z測多種抗原抗體系統(tǒng)如細菌、病毒、腫瘤細胞表面抗原等。一個親合素(avidin)分子可以結(jié)合4個生物素分子(biotin)。結(jié)合非常穩(wěn)定。親合素和生物素都可與抗全、酶、熒光素等分子結(jié)合，而不影響后者的生物活性。一個抗體分子可偶聯(lián)90個生物素分子，通過生物素又可連接多個親合素。因此大提高檢測的敏感度。目前應(yīng)用生物-酶標(biāo)親合素系統(tǒng)(biotinavidinsystem-ELISA,BAS-ELISA)，它是通過生物素標(biāo)記抗體連接免疫反應(yīng)系統(tǒng)，同時借助生物素化酶或酶標(biāo)親合素引入酶與底物反應(yīng)系統(tǒng)。

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