對于小鼠白介素6 ELISA免疫測定，您真的了解嗎?

  ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定( Enzyme-linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。此項技術自70年代初問世以來，發展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫學科學的許多領域。ELISA免疫測定,您真的掌握透徹了嗎?

  ELISA免疫測定目的是?

  1.測定體液中的各種蛋白質，包括含量極少的蛋白質如甲胎蛋白等;

  2.測定激素，包括小分子量的甾體激素等;

  3.測定抗生素和藥物;

  4.測定病原體抗原，HBsAg、HBeAg等;

  5.利用純化的抗原檢測標本中的抗體，例如抗-HBs等;

  ELISA免疫測定原理：

  ①使抗原(或抗體)結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性;

  ②使抗原(或抗體)與某種酶聯結成酶標 抗原(或抗體)，而且此酶標抗原(或抗體)既保留其免疫活性，又保留其酶活性;

  ③測定時將受檢標本(抗體或抗原)和酶標抗原(或 抗體)按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進行反應，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其它物質分開，zui后結合 在固相載體上的酶量與標本中受檢的抗體或抗原量成一定比例;再加入酶反應底物后，底物被酶催化后變為有色產物，根據其顏色反應的 深淺進行定性或定量分析，以了解被測標本中抗體或抗原含量。

  小鼠白介素6 ELISA免疫測定步驟：

  1.包被;

  2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔);

  3.加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。

  4.加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘;

  5.終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml;

  6.結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm處，以空白對照孔調零后測各孔OD值。

  注意：引起ELISA測定錯誤結果的原因有標本因素、試劑因素、操作因素。

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