古朵快訊：ELISA實(shí)驗(yàn)之細(xì)胞污染的預(yù)防與對策

  我們在進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)時，往往會出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)用的細(xì)胞遭受污染的情況，從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確，古朵生物向大家介紹一下如何預(yù)防細(xì)胞污染以及污染后的對策。

  (一)污染的預(yù)防

  預(yù)防是防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的辦法。只有預(yù)防工作做在前，才能將發(fā)生污染的可能性降到小程度。一般預(yù)防可從以下幾方面著手：

  1、添加抗生素

  2、從物品、用品消毒滅菌著手

  細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌除菌要仔細(xì)，并在無菌試驗(yàn)陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。

  3、從操作者做起

  (1)進(jìn)無菌室前要用肥皂洗手，按規(guī)定穿隔離衣。工作開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。

  (2)操作者動作要輕，必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口，并將瓶口轉(zhuǎn)動燒灼。操作時盡量不要談話，若打噴嚏或咳嗽應(yīng)轉(zhuǎn)向背面。

  (3)操作時要常換吸管，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去。實(shí)驗(yàn)完畢用消毒水浸泡的紗布擦臺面。

  4、防止細(xì)胞交叉污染

  (1)在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時，所用器具要嚴(yán)格區(qū)分。

  (2)在進(jìn)行換液或傳代操作時，注射器和滴管不要觸及細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶口，以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞。 '

  (3)細(xì)胞一旦購置或從別處引入，均應(yīng)及早留種凍存，一旦發(fā)生污染可重新復(fù)蘇培養(yǎng)。

  5、無菌室的徹底消毒

  (1)0.1%新潔爾滅全面徹底擦洗無菌室。

  (2)甲醛熏蒸法：甲醛是一種廣譜滅菌劑菌，其水溶液和氣休對各種細(xì)菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。

  (3)細(xì)胞培養(yǎng)，首先要避免污染，但在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，有了污染用適當(dāng)?shù)姆椒ㄇ宄?，這樣也可以保證細(xì)胞培養(yǎng)的成功。

  (二)污染清除方法

  培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。如果污染細(xì)胞價值不大，宜棄之。在尋找原因后徹底消毒操作室，復(fù)蘇或重新購置細(xì)胞，再培養(yǎng)。污染細(xì)胞價值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除：

  1、細(xì)菌和真菌的清除

  抗生素對殺滅細(xì)菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥。預(yù)防用藥比污染后再用藥。預(yù)防用藥一般用雙抗生素，污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時，再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期有效。

  2、支原體的清除

  (1)用MRA處理：用MRA(Mycoplasma Removal Agent)處理細(xì)胞，每4天換一次液,連續(xù)處理15天以確保細(xì)胞純潔健康，。

  (2)用清洗純化法清除支原體污染的方法：細(xì)胞營養(yǎng)馴化→細(xì)胞群的篩選→細(xì)胞清洗→反復(fù)離心洗滌。其原理是利用離心力、細(xì)胞、微生物質(zhì)量和懸液的浮力差達(dá)到清除支原體的目的。由于支原體個體小且除發(fā)酵支原體外多為細(xì)胞外寄生，所以通過反復(fù)洗滌細(xì)胞和低速離心換液使其中潛在的支原體數(shù)量降低限。如結(jié)合敏感抗生素的抑殺作用，可達(dá)到好的效果。

  (3)藥物輔助加溫處理：先用藥物處理后，再將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時，可殺死支原體，但對細(xì)胞有不良影響。

  (4)使用支原體特異性血清：用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性，并且5個月后仍為陰性。但此法比較麻煩，不如用抗生素方便、經(jīng)濟(jì)。

  做好細(xì)胞污染的預(yù)防在ELISA實(shí)驗(yàn)中是非常重要的，盡量不讓細(xì)胞遭受污染，如果細(xì)胞被污染了，也要及時處理，不然可能會影響到終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，大家一定要注意。

  上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。