ELISA實(shí)驗(yàn)的基質(zhì)效應(yīng)及常見問題解析

  在ELISA實(shí)驗(yàn)中，偶爾會(huì)遇到樣品濃度挨近試劑盒的靈敏度就容易發(fā)生樣本OD450值低于空白值的現(xiàn)象，特別是在血清和血漿樣本中。這就有可能是基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)果。

  那什么是基質(zhì)效應(yīng)呢?

  基質(zhì)效應(yīng)：

  分析中，基質(zhì)指的是樣本中被分析物以外的組分，基質(zhì)常常對(duì)分析物的分析進(jìn)程有顯著的煩擾，并影響分析成果的準(zhǔn)確性，這些影響和煩擾被稱為基質(zhì)效應(yīng)。

  仿照物與被測樣本在蛋白豐度、復(fù)雜性、pH等要素都會(huì)存在差異。當(dāng)單個(gè)樣本或少量樣本值低于空白值時(shí)，可能是過錯(cuò)要素，這時(shí)應(yīng)增加重復(fù)，進(jìn)步操作技術(shù)。當(dāng)許多樣本都低于空白值時(shí)，應(yīng)思考基質(zhì)效應(yīng)的影響，建立校正曲線予以修改。

  ELISA試劑盒在開發(fā)進(jìn)程中，標(biāo)準(zhǔn)品不能選用人或動(dòng)物血清、血漿作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的稀釋液，只能選用其仿照物。當(dāng)樣本的基質(zhì)與其仿照物對(duì)比，下降抗原抗體的聯(lián)絡(luò)，便產(chǎn)生了樣本值低于空白值的現(xiàn)象。構(gòu)成樣本值無法計(jì)算出數(shù)值，或許數(shù)值為負(fù)。

  如今常用的去掉基質(zhì)效應(yīng)的方法是，經(jīng)過已知分析物濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，一同盡可能堅(jiān)持樣本中的基質(zhì)不變，建立一個(gè)校正曲線。

  講到了這里，那我們要如何去判斷是否是基質(zhì)效應(yīng)呢?

  當(dāng)單個(gè)樣本或少量樣本值低于空白值時(shí)，可能是實(shí)驗(yàn)操作出現(xiàn)問題，這時(shí)應(yīng)增加重復(fù)，進(jìn)步操作技術(shù)。當(dāng)許多樣本都低于空白值時(shí)，應(yīng)思考基質(zhì)效應(yīng)的影響，建立校正曲線予以修改。基質(zhì)效應(yīng)的原因錯(cuò)綜復(fù)雜，有可能是樣品中存在的基質(zhì)導(dǎo)致原抗體的聯(lián)絡(luò)結(jié)合能力下降，便產(chǎn)生了樣本值低于空白值的現(xiàn)象。導(dǎo)致樣本值無法計(jì)算出數(shù)值，或許數(shù)值為負(fù)。雖然原因復(fù)雜，但有方法可以用來評(píng)估基質(zhì)效應(yīng)。

  01種：線性稀釋

  一般來講，抗原和捕獲抗體、檢測抗體之間的結(jié)合作用很強(qiáng)，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結(jié)合，而造成基質(zhì)效應(yīng)的非特異結(jié)合的力要弱很多，如果不斷稀釋樣品，非特異結(jié)合造成的干擾會(huì)逐步減少，測量值也接近真實(shí)值。沒有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，無論如何稀釋，測量值都和真實(shí)值吻合。而有基質(zhì)效應(yīng)時(shí)，稀釋會(huì)造成非特異性結(jié)合比例的減少，測量值也相應(yīng)地產(chǎn)生很大改變。

  02 第2種：摻入回收率實(shí)驗(yàn)

  將低、中和高濃度的分析物摻入到已測定過濃度的樣本中，摻入前后實(shí)測到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現(xiàn)。回收率介于80-120%，才符合標(biāo)準(zhǔn)。

  如何避免基質(zhì)效應(yīng)：

  基質(zhì)效應(yīng)可以通過產(chǎn)品研發(fā)階段的優(yōu)化盡可能去消除的。澤葉生物針對(duì)ELISA產(chǎn)品研發(fā)進(jìn)行了多種優(yōu)化。ELISA試劑盒在開發(fā)進(jìn)程中，標(biāo)準(zhǔn)品不選用人或動(dòng)物血清、血漿作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的稀釋液，只能選用其仿照物。我們量身定制的緩沖液系統(tǒng)，這些優(yōu)化后的緩沖液體系能很好消除基質(zhì)效應(yīng)。還有當(dāng)檢測某個(gè)分析物時(shí)，其他相關(guān)因子或類似結(jié)構(gòu)因子如果有非特異性結(jié)合，也會(huì)導(dǎo)致基質(zhì)效應(yīng)，我們也因此做了大量的交叉反應(yīng)，確保沒有明顯的交叉反應(yīng)和干擾。而且我們試劑盒必須通過嚴(yán)格的基質(zhì)效應(yīng)測試，全部包括線性稀釋和摻入回收率實(shí)驗(yàn)，并把測試結(jié)果記錄在說明書中。

  ELISA試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。