常見ELISA試劑盒售后問(wèn)題解答

  ：標(biāo)曲顯色過(guò)強(qiáng)無(wú)明顯梯度

  1、主要懷疑點(diǎn)：洗板不充分：

  1.1、機(jī)器洗版：確保機(jī)器設(shè)置的針頭能吸干孔中液體，并且加液針頭能加液大于350ul，加液針頭沒(méi)有被異物或者結(jié)晶鹽堵住。

  1.2、手動(dòng)洗板，嚴(yán)格按照步驟，使用干凈滅菌的槍頭和加樣槽，使用無(wú)氧化劑的吸水紙。加350ul洗液，靜置90秒，在吸水紙上拍干孔中液體后再加入下一步洗液或者試劑。

  1.3、特別注意，在加入TMB前的洗板步驟極其重要，殘留的HRP酶會(huì)直接導(dǎo)致TMB顯色。

  2、次要懷疑點(diǎn)：

  2.1、TMB 已經(jīng)污染，檢測(cè)TMB是否透明無(wú)色，如果偏藍(lán)就是污染了。

  2.2、檢查配制洗液的水是否污染，要求使用的水是雙蒸水，三蒸水或無(wú)離子水，水中的Fe3+,Cu3+,Co3+等過(guò)渡金屬，以及HClO都會(huì)氧化TMB。

  2.3、酶標(biāo)板受潮，長(zhǎng)霉，或者試劑過(guò)期。

  2.4、環(huán)境污染，空氣中有導(dǎo)致顯色的物質(zhì)或者粉塵。

  Top2：顯色較弱或不顯色，沒(méi)有說(shuō)明書提供的數(shù)據(jù)陽(yáng)性強(qiáng)

  可能原因分析：

  1、檢查標(biāo)準(zhǔn)品是否受潮或者拿錯(cuò)

  2、檢查試劑是否按照說(shuō)明書中要求的保存條件保存，特別是濃縮檢測(cè)抗體和濃縮SABC， 如果放在-20度，融化后會(huì)嚴(yán)重影響其活性。

  3、移液器是否校準(zhǔn)，可以用去離子水較準(zhǔn)移液器，1000ul=1.0g 100ul=0.1g 10ul=10mg

  4、37度培養(yǎng)箱是否校準(zhǔn)溫度(建議用水銀溫度計(jì)放入水杯中，平衡12小時(shí)以上進(jìn)行測(cè)量)。

  5、SABC工作液和TMB在孵育前進(jìn)行37度平衡半小時(shí)。

  6、未嚴(yán)格按照說(shuō)明書紙質(zhì)版提供的方法操作。

  7、試劑盒過(guò)期。

  Top3：復(fù)孔做的不好，CV值差異大

  可能原因分析：

  1、復(fù)孔OD450數(shù)值在0.5-2.5之間計(jì)算的偏差相對(duì)較小，小于0.5會(huì)由于操作誤差導(dǎo)致計(jì)算的CV值偏高，復(fù)孔樣品數(shù)量在5-10個(gè)佳。

  2、操作時(shí)按照標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)作進(jìn)行加樣，比如要求槍頭不能碰觸到孔壁內(nèi)側(cè)和底面，槍頭尖部的殘留液體可以觸碰到液面，使之流入樣品孔。

  3、加樣盡量快速準(zhǔn)確，不要產(chǎn)生氣泡。

  4、樣品需要做預(yù)實(shí)驗(yàn)，使用不同濃度進(jìn)行測(cè)試，找到佳稀釋比。錯(cuò)誤的稀釋比會(huì)導(dǎo)致復(fù)孔誤差大

  Top4：顯色太快，背景小于0.2，但是樣品沒(méi)有陽(yáng)性。試劑盒工作正常，但是樣品沒(méi)有陽(yáng)性。

  可能原因分析：

  1、樣品是否保存妥當(dāng)。蛋白容易降解，好保存在-80℃，或者新鮮樣品立即檢測(cè)。

  2、樣品含有的基質(zhì)影響抗原抗體結(jié)合，導(dǎo)致沒(méi)有陽(yáng)性。需要適當(dāng)稀釋樣品 1/5，1/10，1/100，1/1000來(lái)摸索佳檢測(cè)稀釋比，稀釋液稀釋樣品后會(huì)消弱基質(zhì)效應(yīng)，陽(yáng)性就會(huì)升高。

  3、部分試劑盒要求4度過(guò)夜孵育樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，如果樣品稀釋后還是檢測(cè)不到陽(yáng)性，建議4度16小時(shí)孵育標(biāo)準(zhǔn)品和樣品，其它步驟在按照說(shuō)明書提供的溫度和時(shí)間進(jìn)行操作。

  4、如果是特殊的樣品，請(qǐng)通過(guò)郵件與我們技術(shù)支持進(jìn)行聯(lián)系。

  TOP5：稀釋過(guò)的樣本OD 值比沒(méi)有稀釋的樣本值高些

  1、血清有基質(zhì)效應(yīng)，會(huì)導(dǎo)致試劑盒回收率下降。所以用原液檢測(cè)數(shù)值會(huì)低于稀釋后的數(shù)據(jù)。

  2、ELISA試劑盒提供的稀釋液有抗基質(zhì)成分，說(shuō)明書要求樣品至少稀釋1倍以上

  3、血清的基質(zhì)的一類異嗜性抗體或者溶血后的物質(zhì)，這些物質(zhì)會(huì)封閉捕獲抗體，導(dǎo)致抗體無(wú)法結(jié)合樣品中的蛋白，當(dāng)稀釋后 這類物質(zhì)效應(yīng)下降，回收率就升高。

  Top6：標(biāo)曲方程選擇問(wèn)題

  一般我們選擇曲線平滑上升或者下降，所有點(diǎn)都在曲線上，R值接近于1的方程

  ELISA 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。